Re: [討論] 存菌? 凍菌?

看板Biotech (生命科學)作者ararthur時間17年前 (2009/02/27 01:06)推噓0(0推 0噓 0→)

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先謝謝你的回答^^ 不過還是有些問題想再請教... ※ 引述《uolink (uolink)》之銘言： : ※ 引述《ararthur ()》之銘言： : : 因為最近開始做細菌的實驗 : : 但實驗室的背景並沒有太多養細菌的protocol : : 所以想請問一下 : : 為什麼我們實驗室裡會有一些在常溫下存放 : : 有裝著agar和菌的小管呢? : : 並且其年限已經不可考 : 我想就把他們丟了吧可...他們還會長耶@@ 但菌數不多就是了而且看起來好像是跟菌種中心買的說... : : 我以為存菌必須加入15% glycerol 混勻後置入-80度的冰箱 : : 但不曉得為什麼會有這種菌株的存放方式 : : 所以想請教各位 : glycerol 是最簡單便宜的抗凍劑可避免因為冰凍產生的冰晶傷害細菌 : : 另外也想問問如果要從-80度裡取出之前存的菌回來養 : : 應該怎麼樣解凍比較好 : 我假設你是用 E Coli : 900uL 菌液 + 400 uL glycerol 冰 -80 : 每次要養用 200mL 的 pipet 裝上 tip 輕挑一塊丟到 LB 就可以養起來 : 凍管馬上冰回去可以用非常多次嗯嗯但因為實驗需求我的菌兒們並非是同一種菌而是由某隻菌的monocolony(就是年限不可考的菌^^")挑出來後進行random mutation的試驗固可能裡面有著許多種菌我也希望能有許多種菌那這樣子的話就沒辦法直接挑一塊冰了因為沒辦法涵蓋全部的菌種了吧... 所以說想說如果真的要完全解凍成液態才vortex取菌的話步驟應該是如何才對呢? 另外我也有聽說完全解凍菌會死掉的說法不曉得正不正確!? 或是乾脆建議把整塊冰挖起來放下去呢? 這樣似乎有點粗魯... 再次謝謝^^" : : 我現在用的方法是-20放置1 hr, 冰箱上層放置1 hr 下層放置1 hr : : 然後才加100ul 進入新的LB medium(15~20ml) : : 不過覺得長得很慢很慢 : : 所以這個地方有沒有什麼改善的空間呢? : : 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.167.30.61