Re: [求救] WB internal control 定量問題

看板Biotech (生命科學)作者huangsw (Orz)時間7年前 (2017/03/06 14:32)推噓1(1推 0噓 0→)

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43 : 我們家跑WB前會先把sample用分光光度儀，595 nm測吸光值後， : 算好個別濃度，再決定每個well要loading的量。這邊我想請教的是, 你的材料來源為何? 我知道你要跑WB所以一定是下蛋白質. 但是你用595nm 定量的原因是? 是細菌嗎? : 別人家是不測吸光值， : 第一次都先直接loading一樣多的sample，然後直接跑internal control (tubulin)， : 跑出來的結果去反算sample應該要loading的量， : 所以第二次可能每個well sample量都不一樣，但internal control是一樣的。 : 雖然乍看之下好像沒甚麼大不了，但是總覺得...不夠嚴謹? : 對方的解釋是說，他們覺得以internal control為標準就可以了， : 但如果sample個別本身的internal control就有差異了呢? : 還是這已經是可以通用的規則，internal control就能當標準化使用? : 如果已經是通用標準的話我想就接受了，不然還是回來遵循老方法吧... : 希望有人可以跟我討論，謝謝~ 這邊提供一個方向可以參考常見的internal control 通常都是一些跟細胞含量有關係而非給藥與否相關的細胞蛋白. 最常見的就是細胞骨架類蛋白質. 他們這樣做有個原因可能是, seeding時, 雖然細胞數接近, 但是細胞的分化生長, 仍可能導致最後每單位體積內的細胞數是不同的, 縱使差異可能不大. 但是WB這種訊號會被放大的實驗, 仍可能會出現肉眼可見的差異. 呼應上上一段, 故, 他們採用internal control做為體積校正的參考, 藉此調整下sample的量, 提供給您參考. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.69.37.121 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1488781965.A.E8F.html ※ 編輯: huangsw (203.69.37.121), 03/06/2017 14:50:41